金牌酶（热启动酶）

金牌酶用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT － PCR ；特别适合临床 PCR 诊断试剂，这样可以降低运输条件和降低对临床操作人员的要求。

金牌酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，经过化学修饰，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

•  在常温下没有聚合酶的活性，需经过 95 ℃ 15mins 的高温造成化学修饰基团的脱落，然后才有聚合的活性；这样就避免在低温阶段的非特异性扩增；大大提高了 PCR 反应的灵敏度和特异性。随着 PCR 扩增的进行，酶活性会被逐步释放，这样就有效提高扩增效率及产物量。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；无 3 '到 5 ‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用于实时荧光 PCR 。

•  具有 3 ‘端加 A 的功能，产物经纯化后可直接用于 T － A 克隆。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

•  最佳延伸温度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 浓度 1.5mM ，最佳 dNTPS 浓度 0.2mM , 延伸速度为 2000base/min 。

金牌酶单位定义

在 74℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 终反应体积为 50ml 。

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